За поуздане резултате микробиолошких анализа од највеће је важности одабрати одговарајући узорак, правилно га узети, доставити у лабораторију или привремено чувати до транспорта у лабораторију (видети табелу 1). У табели бр. 2 дате су препоруке за чување узорака до пријема у микробиолошку лабораторију.

 Врсте узорака за микробиолошке анализе су:

  1. Узорци горњих дисајних путева (брис ждрела, брис усне дупље, брис језика, брис носа, аспират синуса);
  2. Узорци доњих дисајних путева (искашљајни спутум, ендотрахеални, трахеални узорци, БАЛ-бронхоалвеоларни лават);
  3. 3. Брис површинске и дубоке ране, гној, аспират, пунктат, жуч, брис спољашњег ушног канала, садржај средњег уха, брис коњунктиве);
  4. Узорци уринарног тракта (урин методом средњег млаза, урин у кесици – код мале деце, урин код сталног катетера);
  5. Узорци гениталног тракта жена и мушкараца (вагинални и цервикални брис, вагинални брис на бактеријску вагинозу, ејакулат, експримат простате, брис гланса пениса),
  6. Узорци гастоинтестиналног тракта (столица, ректални брис, перианални отисак),
  7. Кожа, длака, нокти, скарификат;
  8. Крв/серум;
  9. Ликвор и стерилне телесне течности (перикардна, перитонеална, плеурална, синовијална течност);
  10. Ткива;
  11. Крпељ

 

Методе микробиолошког испитивања које се раде у Центру за микробиологију су:

  1. Бактериолошка
  2. Миколошка,
  3. Паразитолошка
  4. Серолошка,
  5. Имунохроматографска
  6. Real time PCR

 

Узимање биолошког материјала врши се у просторији бр. 9 у приземљу зграде Центра за микробиологију које припада Одељењу за клиничку микробиологију.

 

Пацијенти који доносе сами узорак на анализу, предају техничару узорак кроз стакло шалтера.

Пацијенти којима узорак треба да се узме на лицу места, улазе по позиву у просторију за узимање узорака.

 

Пријем материјала и узорковање за микробиолошку анализу је од 07.00  до 09.00 сати.

 

За миколошке анализе, пријем и узорковање материјала је од 10.00 до 11.00 сати.

 

Издавање резултата испитивања се врши на шалтеру, у времену од 14-15 сати.

 

Табела 1: врста узорка, метода испитивања, узимање, транспорт материјала, очекивано време до резултата

 

Узорак

Анализа параметара/метода испитивања

Узорковање

Транспорт до лабораторије

Очекивано време до резултата

(TAT време)*

БРИС ГРЛА

Бактериолошки/миколошки преглед

Шпатулом притиснути језик; стерилним брисом прећи преко задњег зида ждрела, тонзила и инфламираних делова, стално ротирајући брис око своје осовине и избегавајући језик и увулу. Узети и пурулентни садржај ако је присутан. Након узимања материјала, брис одмах ставити у стерилну тубу.

v  у току 2 сата – на собној температури.

v  до 24 сата –   користити  аеробне транспортне подлоге (Амиес, Стуарт) и чувати на собној температури.

2 дана

БРИС УСНЕ ДУПЉЕ, ЈЕЗИКА

Бактериолошки/миколошки преглед

Брисом прикупити оралну секрецију или остатке са површине лезије и тај брис одбацити. Другим брисом узети узорак са лезије, ротирајући га и избегавајући поља нормалног ткива. Брисом прећи и преко протезне површине (ако постоји). Шпатула може бити од помоћи да спречи контаминацију са осталих делова усне дупље. Узети гној ако је присутан.

v  у току 2 сата на собној температури.

v  до 24 сата користити Ами-еву транспортну подлогу или чувати у  фрижидеру на 4ºС (мање повољно).

2 дана

БРИС НОСА

Бактериолошки/миколошки преглед

Рећи пацијенту да забаци главу уназад, ући брисем у ноздрву не дотичући атријум и обрисати ротирајући полукружно у нивоу носних шкољки. Исти брис користити за обе ноздрве.

v  у току 2 сата на собној температури.

v  до 24 сата користити Ами-еву транспортну подлогу или чувати у  фрижидеру на 4ºС (мање повољно).

2 дана

 

Узорак

Анализа параметара/метода испитивања

Узорковање

Транспорт до лабораторије

Очекивано време до резултата

(TAT време)*

БРИС НАСОФАРИНКСА

Детекција генома RNK вируса: real time PCR: Influenza A и B, RSV, Sars CoV2

Рећи пацијенту да забаци главу уназад, благо подигнути врх носа и полако ући танким флокуларним брисем уз носни септум по доњем носном ходнику до назофаринкса, лагано ротирати брис и извући. Размутити брис у епрувети са вирусним транспортним медијумом. Исећи брис довољно да епрувета може да се затвори.

v  Без транспортне подлоге до 6 сати на +4°С; након тога замрзнути на -70°С;

v  Са транспортном подлогом до 72 сата на +4°С; након тога замрзнути на -70°С.

2 дана

Детекција бактеријског генома: real time PCR:  Chlamydia pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae,

Legionella pneumophila; Bordetella pertussis/ parapertussis;

7  дана

Детекција гљива: real time PCR: Candida, Aspergillus,

Pneumocystis

СПУТУМ

Бактериолошки/миколошки преглед

Одмах по буђењу, пацијент треба да опере зубе и испере уста млаком водом, непосредно пре узимања узорка искашљаја. Извести дубоки искашљај, потпомоћи се нагнутим положајем тела, напред и наниже. Искашљати директно у стерилну посуду са завртњем. Потребно је добити узорак из доњих партија респираторног тракта, 5-10 мл. Минимална количина узорка за бактериолошко  и PCR испитивање је 1мл.

v  до 2 сата од узимања узорка на собној температури у посуди у којој је узоркован

v  До 24 сата од узимања узорка на температури фрижидера 4ºС (мање повољно).

3 дана

Детекција бактеријског генома: real time PCR:  Chlamydia pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae,

Legionella pneumophila; Bordetella pertussis/ parapertussis;

7 дана

Детекција гљива: real time PCR: Candida, Aspergillus,

 

 

Узорак

Анализа параметара/метода испитивања

Узорковање

Транспорт до лабораторије

Очекивано време до резултата

(TAT време)*

БРИС СПОЉАШЊЕГ УШНОГ КАНАЛА

Бактериолошки/миколошки преглед

Пацијент седа на столицу и окреће главу у једну страну. Узоркивач повлачи ушну шкољку на горе и назад код одраслих, а код деце на доле и напред. Навлаженим брисом отклонити било какав садржај или красте из спољњег ушног канала. Узети узорак са другим брисом.  Ући брисем бочно ка споља, не дубоко и лако ротирати брис, напред – назад. Исто поновити и са другим брисем. За једно ухо узети 2 бриса.

За миколошки преглед  препоручује се узети скарификат спољашњег ушног канала, мада се може користити и брис.

v  у току 2 сата на собној температури.

v   

v  до 24 сата користити Ами-еву транспортну подлогу или чувати у  фрижидеру на  4 ºС (мање повољно).

3 дана

 

БРИС КОЊУНКТИВЕ

Бактериолошки/миколошки преглед

Лаборант претходно навлаженим брисом у стерилном ФР-у узима узорак. Уколико је потребно, очистити подручје ока од нечистоћа и секрета стерилном газом. Рећи пацијенту да јако отвори очи и да гледа у правцу носа на горе. Палцем доњи капак повући на ниже. Брисем добро обрисати коњунктиву доњег капка и форникаса од спољашњег према унутрашњем углу ока, притом пазећи да се не додирне кожни део капка. Ако је индикован препарат по Граму (узорак код неонатуса), прави се размаз материјала на чистом предметном стаклу.

v  у току 2 сата на собној температури.

v  до 24 сата користити Ами-еву транспортну подлогу или чувати у  фрижидеру на  4 ºС (мање повољно).

3 дана

Детекција бактеријског генома/ real time PCR:

Chlamydia trachomatis

Најпре уклонити ексудат стерилном газом, уколико га има. Заротирати брис неколико пута (3-5 сек.) како би се покупило довољно ћелија.

v  Без транспортне подлоге до 24 сати на 4°С; након тога замрзнути на -20°С / -70°С;

v  Са транспортном подлогом до 7 дана на 4°С; након тога замрзнути на -20°С / -70°С;

7 дана

 

Узорак

Анализа параметара/метода испитивања

Узорковање

Транспорт до лабораторије

Очекивано време до резултата

(TAT време)*

БРИС УРЕТРЕ

 

Бактериолошки/миколошки преглед

Пре узимања бриса уретре, пацијент не треба да мокри најмање 2 сата.

Танким брисом ући кроз уретрални отвор око 2-4цм, ротирати га, оставити га на том месту најмање 2 секунде да се прикупи узорак. Водити рачуна о могућој контаминацији флором вулве или коже препуцијума.

v  у току 2 сата на собној температури.

v  до 24 сата користити Амиеву транспортну подлогу или чувати у  фрижидеру на  4ºС (мање повољно).

3 дана

 

 

Детекција генома DNK вируса: real time PCR:  HPV, Herpes simplex вирус тип 1,2

 

Детекција бактеријског генома/ real time PCR:

Chlamydia trachomatis,  T.vaginalis,

N.     gonorrhoeae,

Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum

Ставити брис у транспортну епрувету и преломити га тако да одговара висини епрувете, да се епрувета може затворити/ или вратити у оригиналну епрувету

v  Без транспортне подлоге до 24 сати на 4°С; након тога замрзнути на -20°С / -70°С;

 

v  Са транспортном подлогом до 7 дана на 4°С; након тога замрзнути на -20°С / -70°С;

7 дана

 

Mycoplasma hominis

/Ureaplasma spp. култивација са антибиограмом

Брис добро испрати у транспортној подлози – Р1, добро га оцедити уз ивицу бочице и бацити брис

v  Хранљива подлога у којој је размућен брис транспортује се на собној температури до 24 сата од узимања узорка

2 дана

ЕЈАКУЛАТ

Бактериолошки/миколошки преглед

Пре давања узорка потребно је да пацијент уринира. Након тога обавити тоалету спољних гениталија водом и сапуном. Семену течност сакупити у стерилну посуду и чврсто затворити

v  у току 2 сата на собној температури.

 

3 дана

 

 

 

Узорак

Анализа параметара/метода испитивања

Узорковање

Транспорт до лабораторије

Очекивано време до резултата

(TAT време)*

УРИН

Бактериолошки/миколошки преглед

Узети први јутарњи урин  или ако је пацијент већ мокрио, узорковати најмање 4 сата након задњег мокрења. Опрати руке.

Метода средњег млаза код жена: опрати водом подручје вулве, у смеру од напред према назад.

Метода средњег млаза код мушкараца: опрати водом гланс пениса.

Не брисати се пешкиром. Испустити први млаз (око 20 мл урина). Сакупити следећих 20-30 мл (максимално) у стерилну посуду пазећи да се не додирује руб. Чврсто затворити посуду.

За испитивање урина код беба – користити стерилну кесу за сакупљање урина. Стерилну кесицу залепити на очишћену површину гениталија. Сакупљен урин пребацити у стерилну бочицу за урин.

За испитивање урина из катетера: Прво затворити дренажу урина, да би се створила колекција урина у катетеру. Што је могуће проксималније у односу на спој катетера и дренажне кесе извршити дезинфекцију катетера прикладним дезинфекционим средством. Пунктирати катетер иглом и шприцем у који ће се аспирирати урин. Препорука је да се узоркује након промене катетера, уз претходну тоалету гениталија. Првих 15-30 мл урина испустити  ван, а затим узорковати директно у стерилну посуду за уринокултуру.

v  у току 2 сата на собној температури.

v  до 24 сата чувати у  фрижидеру на  4ºС

2 дана

Испитивање на Trichomonas vaginalis

Први млаз јутарњег урина

У року од 2 сата на  температури тела.

1 дан

 

Узорак

 

Анализа параметара/метода испитивања

 

Узорковање

 

Транспорт до лабораторије

 

Очекивано време до резултата

(TAT време)*

УРИН

Детекција бактеријског генома/ real time PCR:

Chlamydia trachomatis,  T.vaginalis, N.gonorrhoeae,

Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum

Потребно је дати први млаз првог јутарњег урина, како би покупио епителне ћелије уретре.Уколико се не узима први јутарњи урин, пацијент пре давања узорка не треба да мокри најмање 2 сата.

 

v  у току 2 сата на собној температури, у бочици за урин 

v  до 24 сата чувати у  фрижидеру на  4ºС

7 дана

 

Детекција генома DNK вируса: real time PCR:   Herpes simplex вирус тип 1,2

 

 

Узорак

Анализа параметара/метода испитивања

Узорковање

Транспорт до лабораторије

Очекивано време до резултата

(TAT време)*

БРИС ВУЛВЕ

Бактериолошки/миколошки преглед

Рећи пацијенткињи да се скине и легне на кревет у гинеколошки положај. Брисем пребрисати површину вулварне регије. Ако се тражи миколошки преглед узети по 2 бриса.

v  у току 2 сата на собној температури.

v  до 24 сата користити Ами-еву транспортну подлогу или чувати у  фрижидеру на  4ºС

 

 

 

3 дана

 

 

БРИС ВАГИНЕ И

ЦЕРВИКСА

 

 

Бактериолошки/миколошки преглед

Материјал се узима у специјалистичкој амбуланти, од стране лекара и транспортује у лабораторију. Узети по 2 бриса

Напомена за пацијенте: Најмање два дана пре узимања узорака не треба користити вагиналете (антибиотске или друге врсте) и не испирати вагину раствором. Уздржати се од сексуалних односа 24 сата пре узимања узорака

„Високи „ вагинални брис се, након убацивања спекулума, узима ротирајућим покретима бриса преко површине вагиналног свода.

Цервикални брис: након убацивања спекулума у вагину, једним брисом уклонити секрет или слуз, ако су присутни и тај брис одбацити. Другим брисом ући у ендоцервиx и ротирајућим покретима узети узорак.

v  До 2 сата од узимања узорка на собној температури

v  У транспортној подлози (Стуарт,Амиес) до 24х од узимања узорка на собној температури.

3 дана

M. hominis/ Ureaplasma култивација са антибиограмом

Брис добро испрати у транспортној подлози – Р1, добро га оцедити уз ивицу бочице и бацити брис

v  у транспортном медијуму су стабилни на собној температури до 20 сата,

v  до 72 сата чувати у  фрижидеру на  4°С

2 дана

Узорак

Анализа параметара/метода испитивања

Узорковање

Транспорт до лабораторије

Очекивано време до резултата

(TAT време)*

БРИС ВАГИНЕ И

ЦЕРВИКСА

 

Детекција бактеријског генома/ real time PCR:

Chlamydia trachomatis,  T.vaginalis, N.gonorrhoeae,

Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum

Ставити брис у транспортну епрувету и преломити га тако да одговара висини епрувете, да се епрувета може затворити/ или вратити у оригиналну епрувету

 

v  Брисеви се транспортују увучени назад у транспортну епрувету и транспортују на 4 ºC до 24 сата.

 

v  У транспортном медијуму узорци су стабилни на температури +18-25 ºC до 48 сати, а на 4 ºC до 7 дана.

7 дана

Детекција бактеријског генома/ real time PCR:

Streptococcus agalactiae

Listeria monocytogenes

Escherihia coli

Детекција генома DNK вируса: real time PCR:   Herpes simplex вирус тип 1,2

 

 

Узорак

Анализа параметара/метода испитивања

Узорковање

Транспорт до лабораторије

Очекивано време до резултата

(TAT време)*

БРИС ВАГИНЕ И

ЦЕРВИКСА

Брис за скрининг GBS/култивација

 

Узима се најпре из интроитуса вагине (2цм од интроитуса), без употребе спекулума (не треба „високи“ вагинални брис), а затим се истим брисем узима брис аноректума (довољно 1цм). Брис се враћа у транспортну епрувету (било да је са транспортним медијумом или без)

v  До 2 сата од узимања узорка на собној температури

v  У транспортној подлози (Стуарт,Амиес) до 24 сата од узорковања на собној т.

2 дана

БРИС ЛОХИЈА

Бактериолошки/миколошки преглед

Брис лохија се узима под спекулумом брисањем садржаја лохија.

v  До 2 сата од узимања узорка на собној температури

v  У фрижидеру до 24  сата од узорковања

2 дана

БРИС ИСЦЕДКА ИЗ ДОЈКЕ

Бактериолошки/миколошки преглед

Наквашеном ватом обрисати мамилу, палцем и кажипрстом леве руке стегнути мамилу у корену, брисом обрисати исцеђен секрет са површине мамиле

v  До 2 сата од узимања узорка на собној температури

v  У транспортној подлози (Стуарт,Амиес) до 24 сата од узорковања на собној т.

2 дана

БРИС ПУПКА

 

 

 

Бактериолошки/миколошки преглед

Брис навлажити стерилним ФР, ротирањем обрисати пупак. Узети по 2 бриса.

v  До 2 сата од узимања узорка на собној температури

v  У транспортној подлози (Стуарт,Амиес) до 24 сата од узорковања на собној т.

 

 

3 дана

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Узорак

Анализа параметара/метода испитивања

Узорковање

Транспорт до лабораторије

Очекивано

време до резултата

(TAT време)*

БРИС КОЖЕ /ПРОМЕНЕ НА КОЖИ

Бактериолошки/миколошки преглед

Брисеве навлажити стерилним физиолошким раствором. Влажним брисем, ротирајући, пребрисати површину коже.

v  До 2 сата од узимања узорка на собној температури

v  У транспортној подлози (Стуарт,Амиес) до 24 сата од узорковања на собној т.

 

 

2 дана

БРИС ПОВРШИНСКЕ РАНЕ

Бактериолошки/миколошки преглед

Ако се узима узорак са улкуса, прво очистити место узорковања тупфером који је натопљен сапуницом а потом и 70% алкохолом. Брисом узети узорак гноја или ексудата ако је присутан, што је мање погодан метод. Боље је узорак узети шприцем (са или без игле). Брис мора бити добро засићен; узети понекад 2 бриса (за препарат и културу), у зависности од клиничке слике (консултовати специјалисту).

v  До 2 сата од узимања узорка на собној температури

v  У транспортној подлози (Стуарт,Амиес) до 24 сата од узорковања на собној т.

3 дана

БРИС ДУБОКЕ РАНЕ

Бактериолошки/миколошки преглед

Брисем ротирајући више пута прећи више места у дубини ране, како би се избегла контаминација са коже и околине. Важно је узорак узети из живог ткива, а не из некротичних делова. узети понекад 2 бриса (за препарат и културу), у зависности од клиничке слике (консултовати специјалисту).

v  До 2 сата од узимања узорка на собној температури

v  У транспортној подлози (Стуарт,Амиес) до 24 сата од узорковања на собној т.

3 дана

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Узорак

Анализа параметара/метода испитивања

Узорковање

Транспорт до лабораторије

Очекивано време до резултата

(TAT време)*

СТОЛИЦА (ФЕЦЕС)

Бактериолошки/миколошки преглед

Posle defekacije otvoriti bočicu i kašičicom prikačenom za poklopac uzeti

uzorak stolice. Uzeti sa više mesta i birati sluzave, krvave, gnojave delove, ako ih ima. Voda i urin iz toalet šolje ne smeju da se pomešaju sa uzorkom stolice. Dovoljno je 1-2g dijarealne stolice ili grumen veličine lešnika u slučaju formirane stolice. Zatvoriti i što pre doneti u laboratoriju

v  Do 2 h od uzimanja uzorka

na sobnoj temperaturi

v  U frižideru do 24h od uzorkovanja

4 дана

Преглед столице на Cl. difficile (GDH и токсини A и B)   IH** метода

Након дефекације кашичицом прикаченом за поклопац посуде узети 2-3мл дијареалне столице. Не препоручује се преглед формиране столице

v  < 1 сата од узимања узорка на собној температури

v  У фрижидеру 24-48сати од узорковања

1 дан

Преглед столице на антиген

Helicobacter pylori/

IH**  метода

Након дефекације кашичицом прикаченом за поклопац посуде узети узорак столице више од 1г. Пацијенти не смеју узимати антибиотике 4 недеље, нити смеју узимати инхибиторе протонске пумпе 2 недеље пре узорковања столице

 

v  ≤ 6 сатиод узимања узорка на собној тем.

v  На +4 ºС ≤24 сати

 

1 дан

Преглед столице на  Rota/Adeno вирусе

IH** метода

Након дефекације кашичицом прикаченом за поклопац посуде узети узорак  величине лешника

v  ≤ 6 сатиод узимања узорка на собној тем.

v  На +4 ºС ≤24 сати  

1 дан

Real time PCR метода:

Salmonela, Campylobacter,  Shigella/EIEC;E.coli; H.pylori

v  Без транспортне подлоге до 6 сати на 4°С; након тога замрзнути на -70°С;

v  Са транспортном подлогом до 72 сата на 4°С; након тога замрзнути на -20ºС /-70ºС

7 дана

 

Узорак

Анализа параметара/метода испитивања

Узорковање

Транспорт до лабораторије

Очекивано време до резултата

(TAT време)*

СТОЛИЦА (ФЕЦЕС)

Паразитолошки преглед столице –  препарат из седимента (цисте протозоа / јаја хелмината)

Паразитолошки преглед столице (цисте протозоа): IH** метода

Узети столицу на претходно описан начин. Столица не мора бити свежа, али не сме бити старија од 2 дана. За то време столицу држати на температури фрижидера

v  До 2 сата од узимања узорка на собној температури

v  У фрижидеру до 48 сати од узорковања

1 дан

Real time PCR метода:

Blastocytis hominis + Dientamoeba fragilis;

Cryptosporidium, Giardia, E.

histolytica

v  Bez transportne podloge do 6 sati na +4°C; nakon toga zamrznuti na -70°C;

v  Са транспортном подлогом 72 сата na 4°C; након тога замрзнути на -20ºС /-70ºС

7 дана

РЕКТАЛНИ БРИС

Бактериолошки/миколошки преглед

Размакнути глутеусе, брисем ући 2-3цм у ректум иза аналног сфинктера и благо заротирати. На брису се мора показати фецес.

Брис ректума узети само у случајевима када није могуће узети узорак столице.

v  у току 2 сата на собној температури.

v  до 24 сата на собној температури.

2 дана

 

ПЕРИАНАЛНИ ОТИСАК

Преглед на Enterobius vermicularis

Пре узимања перианалног отиска не прати перианалану регију најмање 12сати. Перианални отисак се узима рано ујутру, пре устајања из кревета. Одлепити селотејп траку са предметног стакла,налепити је на перианалну регију и притиснути неколико пута на перианалне наборе. Одлепити и вратити назад на предметно стакло. Ставити преко друго предметно стакло и увити у папир.

v  до 2 сата од узимања узорка на собној температури

1 дан

Узорак

Анализа параметара/метода испитивања

Узорковање

Транспорт до лабораторије

Очекивано време до резултата

(TAT време)*

ОТИСАК  КОЖЕ

Преглед на Demodex; Scabies

Благо прстима, у рукавицама, притиснути предилекциона места (око носа,чело,брада) или

иритиране делове лица да изађе садржај из пора, селотејп траком притиснути, са померањем, сва места. Траку налепити на предметно стакло, увити у папир.

v  до 24 сата на собној температури.

1 дан

СКАРИФИКАТ КОЖЕ

Преглед на дерматофите до нивоа рода/ култивација

Пре узорковања пацијент промену на кожи не сме третирати никаквим препаратима најмање 3 дана!

Стерилним скалпелом састругати садржај са периферије, тј. са границе активног кожног процеса директно у отворену Петри шољу

v  до 24 сата на собној температури

14 дана

НОКАТ

Преглед на дерматофите до нивоа рода/ култивација

Ужарити маказе над пламеником и охладити. Над отвореном петри шољом ситно исећи карактеристичне делове нокта или скалпелом састругати измењене површине нокта.

v  до 24 сата на собној температури

ДЛАКА

Преглед на дерматофите до нивоа рода/ култивација

Užariti pincetu nad plamenikom i ohladiti. Isčupati promenjene dlake (bar 10) sa više mesta (poglavine ili brade) i staviti u otvorenu petri šolju

 

Узорак

Анализа параметара/метода испитивања

Узорковање

Транспорт до лабораторије

Очекивано време до резултата

(TAT време)*

КРВ

Бактериолошки/миколошки преглед

Општа припрема: Затворити врата и прозоре у просторији у којој се вади крв; припремити сет за узимање крви (једнократне  рукавице, затворени систем за ваење крви или иглу и шприц, бочице за хемокултуру, антисептик за кожу, дезинфицијенс за чеп боце, стерилне јастучиће од газе, повеску, фластер са облогом,) и контејнер за одлагање медицинског отпада; попунити упутницу за лабораторију.

Припрема особља: опрати руке топлом водом и сапуном, осушити и дезинфиковати их средством на бази алкохола; навући једнократне рукавице по сушењу руку.

Припрема пацијента: потврдити идентитет пацијента, који треба да лежи или стабилно седи током узорковања. Ако се користи затворени систем, бочице за хемокултуру треба да буду испод нивоа пацијентове руке током вађења; ако је пацијент мало дете или новорођенче, крв се не сме вадити без помоћи друге особе.

Дезинфекција боце: прво дезинфиковати тупфером и 70% алкохолом (или хлорхексидином) чеп од боце за

хемокултуру и оставити 1 минут да се осуши. Поступак

поновити и после инокулације крви у боцу.

Дезинфекција места венепункције: место пункције пребрисати 70% алкохолом; затим јодом концентрично, почевши од центра. Оставити да се јод осуши. Након овог корака не палпирати место венепункције! Узети крв. Након венепункције, очистити јод са коже алкохолом.

Крв треба узети из две периферне вене. Ако то није могуће, треба извадити артеријску крв.

Бочице обележити (име и презиме пацијента, ИД број, датум и време вађења крви и име или ИД особе која је вадила крв).

 

За бактериолошки преглед хемокултуре, за одрасле особе, оптимална количина по сету (сет= аеробна и анаеробна боца) је 20-30 мл крви. Деца и новорођенчад – не више од 1% укупне запремине крви.

Напомена 1: Немојте прекорачити максималну запремину коју препоручује произвођач за сваку боцу.

Напомена 2: Ако је запремина крви недовољна за две боце, инокулисати прво аеробну боцу, а остатак инокулисати у анаеробну боцу.

 

Број и учесталост узимања узорака :

Код акутне сепсе, узети 2 узастопна сета са 2 одвојена места венепункције, током било која 24 сата.

Код акутног ендокардитиса, узети најмање 3 сета током 24 сата.

Код субакутног ендокардитиса, узети 3 сета са 3 одвојена места са размаком од најмање 15 минута између сваког узимања. Ако су негативне за 24 сата, узети још 3 сета.

Грозница непознатог порекла: узети 2 сета током првог сата, пре почетка антибиотске терапије. Ако су негативне за 24 сата, узети још 2 сета.

Узети узорак одмах транспортовати до лабораторије, водећи рачуна да се узорак не расхлади, оптимално у року 2-4 сата. Уколико то није могуће, бочице до стављања у апарат за хемокултуре чувати на собној температури у периоду који произвођач препоручује.

Бочице СЕ НЕ СМЕЈУ ЧУВАТИ у фрижидеру!

5 дана за аутоматизоване системе;

 

До 10 дана за не аутоматизоване системе

 

Серолошка дијагностика:

– Латекс аглутинациона метода (ASO, RF, CRP, RPR);

– метода хемаглутинације (TPH)

 

Везати Есмархову повеску, напипати крвни суд у прегибу руке, дезинфиковати 70% алкохолом и након тога то место више не палпирати. Извадити 3-5 мл венске крви,

одвезати повеску, ватом са дезинфекционим средством притиснути место убода и извући иглу.

Узорковање крви за серолошке анализе у вакутајнеру без антикоагуланса – жути вакутајнер. Серум не сме

бити хемолизиран, иктеричан и липемичан.

 

 

 

Транспортује се у вакутајнер системима.

 

v  до 2 сата од узимања узорка на собној темп.

 

v  У случају одложеног транспорта СЕРУМ чувати на температури фрижидера 4 ºС до72 сата

 

v  Дуже од 72 сата чувати на – 20°С

1 дан

 

ELISA метода:

 

CMV IgG, IgM антитела;

HSV (1+2) IgG, IgM антитела;

Rubella IgM, IgG  антитела;

Toxoplasma IgM, IgG  антитела;

Chlamidia trachomatis IgM, IgG  антитела;

Borellia burgdorferi  IgM, IgG  антитела;

Helicobacter pylori IgM, IgG  антитела;

Одређивање С антигена HB  вируса;

анти HCV;

HIV антиген;

Авидитет CMV и Toxoplasma gondii IgG  At

 

Ради утврђивања динамике антитела потребно је узети парни узорак серума у интервалу од 2-3 недеље, а код пацијената са сумњом на лајмску борелиозу 4-6 недеља након првог серума.

 

НАПОМЕНА:

Пре вађења крви у лабораторији, потребан је писани пристанак пацијента.

7 дана

Real time PCR метода:

HCV-квантитативно испитивање

генома;

HBV квантитативно испитивање

генома

Узорковање крви за молекуларне анализе у вакутајнерима са антикоагулансом (ЕДТА) – љубичасти вакутaјнер

У случају одложеног транспорта узорка ПЛАЗМЕ (дуже од 4 сата) чувати на температури  – 20°С

7 дана

ЛИКВОР

Бактериолошки/миколошки преглед

Узорак избора је ликвор, добијен лумбалном пункцијом, према протоколу клиничара.

Узорак треба узети у обраду идеално унутар 10 минута до максимално 2 сата од пункције.

3 дана

СТЕРИЛНЕ ТЕЛЕСНЕ ТЕЧНОСТИ

(абдоминална, перитонеална, перикардијалнaплеурална, синовијална, асцит)

 

Бактериолошки/миколошки преглед

Материјал се узима на одељењу, од стране лекара, према локалном протоколу.

Минимална количина је 1мл, за бактериолошка испитивања. За перитонеалну течност и асцит потребна је већа количина узорка, јер може садржавати мали број организама.

Синовијална течност се може прихватити и у мањој количини, мада може бити сметња за изолацију узрочника.

v  до 2 сата од узимања узорка на собној  температури

 

 

v  У случају одложеног транспорта течност  треба слати у стерилној епрувети са затварачем или инокулисану у боци за хемокултуру.

 

 

 

 

 

 

 

2 дана

 

 

 

 

 

 

ЛЕГЕНДА: 

* ТАТ време – обртно време, односно време од узимања узорка у рад до издавања резултата испитивања

** IH метода – имунохроматографска метода

 

Табела 2: ПРЕПОРУКЕ ЗА ЧУВАЊЕ УЗОРАКА ДО ПРИЈЕМА У МИКРОБИОЛОШКУ ЛАБОРАТОРИЈУ 

Bez transportnih podloga урин

Транспортне подлоге

Чување узорака на температури

Без транспортне подлоге

+ 4ᵒ C ( у фрижидеру ) до 24 сата

+25ᵒ C ( на собној темп.) до 24 сата

ликвор- бактериолошки

спутум

синовијална течност

перикардна течност

цервикални брис

исечци ткива

брис назофаринкса

столица

 брис ждрела

Серум – до 72 сата

 

Транспортне подлоге АЕРОБНЕ (Амиес, Стуарт )

биоптат опекотине

цервикални брис

брис спољашњег ушног канала

вагинални брис

 

 брис површинске ране или кожне промене

брис средњег уха

брис коњуктиве

брис назофаринкса

брис ждрела

Транспортне подлоге

АНАЕРОБНЕ

 

абдоминална течност

интраутерини уложак

амнионска течност

аспират (брис) дубоке ране, абсцеса, интраоперативни

узорци

жуч

аспират плућа

аспират синуса

транстрахеални аспират

Директно засејавање подлоге ( течне или чврсте )

 

крв за хемокултуру

струготина рожњаче

очна водица

сви узорци за откривање N. gonorrhoae и N.meningitis

Без транспортне подлоге

ДНК микроорганизми до 24 сата на температури 4ᵒ С, након тога замрзнути на -20ᵒ С/-70ᵒ С

Молекуларна техника Real time PCR

 

Са транспортном подлогом

ДНК микроорганизми до 7 дана на температури 4ᵒ С, након тога замрзнути на -20ᵒС/-70ᵒ С

Молекуларна техника Real time PCR

Без транспортне подлоге

РНК микроорганизми до 6 сати на температури 4ᵒ С, након тога замрзнути на -70ᵒ С

Молекуларна техника Real time PCR

Са транспортном подлогом

РНК микроорганизми до 72 сата на  4ᵒ С , након тога замрзнути на -70ᵒ С

Молекуларна техника Real time PCR

 

 ОПШТИ ПРИНЦИПИ УЗОРКОВАЊА – Препоруке

Узорак мора потицати са места инфекције, како би се открио етиолошки узрочник;

Узорак се мора узети пре почетка антибиотске терапије, а ако то није могуће, навести примењену терапију;

Узорак узети у одговарајућу стерилну посуду ;

Избегавати контаминацију узорка физиолошком флором;

Посуду са узорком правилно обележити именом и презименом пацијента;

На упуту (поред генералија пацијента) обавезно навести: врсту узорка, датум и време узимања, дијагнозу или водеће симптоме, ев. лабораторијске и епидемиолошке податке, ако су доступни;

Узорке узимати крај болесничког кревета или у амбуланти и доставити у лабораторију у прописаном року;

Уколико се узорак транспортује до лабораторије, поштовати правила транспорта и хладног ланца;

Прибор за узорковање, осим флашица за уринокултуру, се набавља у микробиолошкој лабораторији.

 

УПУТСТВО ЗА САКУПЉАЊЕ, ЧУВАЊЕ И ТРАНСПОРТ УЗОРАКА ЗА ДЕТЕКЦИЈУ

Chlamydia trachomatis Real-TM PCR МЕТОДОМ

У Центру за микробиологију ЗЗЈЗ Кикинда могуће је извршити квалитативну детекцију Chlamydia trachomatis Real-time PCR методом.
Пре узорковања бриса цервикса и уретре, потребно је преузети транспортни медијум и брис за узимање узорака. Брис мора бити са пластичним штапићем и ситетичким врхом од Дакрона/Рејона. Транспортну подлогу до употребе чувати на температури 2-25°С.

УЗОРКОВАЊЕ БРИСА ЦЕРВИКСА
Након апликације спекулума, најпре уклонити слуз или упални ексудат стерилним

брисом или газом.
Тањим брисом ући у ендоцервикални канал, заротирати брис неколико пута (3-5 секунди) како би се покупило довољно ћелија, а затим извући брис без додиривања зидова вагине. Брис се одмах мора уронити у епрувету са транспортном подлогом и енергично размутити у њој. Поломити вишак држача бриса и затворити епрувету.

 

УЗОРКОВАЊЕ БРИСА УРЕТРЕ
Пацијент пре узимања бриса не сме да мокри најмање два сата. Прво се одстрани слуз или упални ексудат стерилним брисом, а затим се танким брисом уђе 2-4cm у уретралну цев и кружним покретима загребе слузокожа уретре. Потом се брис пажљиво извуче, урони и енергично размути у епрувети са транспортном подлогом.

 

УЗОРКОВАЊЕ УРИНА
Пацијент пре давања узорка не сме да мокри најмање два сата. У стерилну пластичн посудицу узорковати 10-20 ml првог млаза урина. Количина урина не сме бити мања од 10ml. Након узорковања флашицу са урином затворити без додиривања унутрашње површине чепа.

 

УЗОРКОВАЊЕ БРИСА КОЊУНКТИВЕ

Најпре уклонити ексудат стерилном газом, уколико га има. Заротирати брис неколико пута (3-5 секунди) како би се покупило довољно ћелија. Брис се одмах мора уронити у епрувету са транспортном подлогом и енергично размутити у њој. Поломити вишак држача бриса и затворити епрувету.

 

Узорци код мушкараца такође могу бити СПЕРМА и ПРОСТАТИЧНА ТЕЧНОСТ.

ПРЕПОРУКА ЈЕ да се узорци уроне у транспортни медијум и обраде одмах по узорковању.

Уколико то није могуће, суве брисеве чувати и транспортовати у року од 1-2h на собној температури (18-25℃), или у року од 4-5 дана на температури од 2-8 ℃.

Након тог времена узорке замрзнути на -20 oC и на тој температури их и транспортовати до лабораторије.

 

 

УЗИМАЊЕ УЗОРАКА, ЧУВАЊЕ И ТРАНСПОРТ  ЗА Real time PCR ДЕТЕКЦИЈУ И ГЕНОТИПИЗАЦИЈУ ХПВ ТИПОВА 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 и 68

 

Пре узорковања бриса цервикса/уретре  потребно је преузети брисеве и транспортни медијум за чување брисева у Центру за микробиологију, Генерала Драпшина 81, Кикинда. Транспортну подлогу до употребе чувати на температури 2-25°С.

 

Припрема пацијента за узорковање

24-48 сати пре узимања узорака треба избегавати: сексуални однос, вагинално испирање, други интравагинални третмани (гелови, креме, контрацептивни средства, дезинфекциона средства, мазива) или други интравагинални маневари (интравагинални брис, вагинални преглед).

Узимање узорка за ХПВ тестирање треба избегавати 3 дана пре менструалног циклуса, у току и 3 дана после менструалног циклуса (присуство крви може утицати на добијање лажно негативних резултата).

 

Узимање узорака код жена

Пре узимања узорка одстранити вишак секрета са ектоцервикса и орифицијума цервикса (уколико је присутан).

 

БРИС СА ЧЕТКИЦОМ

Увући четкицу 1-1,5цм у канал грлића материце док највеће чекиње не додирну ектоцервикс.

Ротирати четкицу 3-4 пута (360о) у правцу супротно казаљке на сату,извадити је из канала.

Четкицу пажљиво ставити у епрувету са 2-3мл транспортног медијума за вирусе.

Енергично мућкати четкицу у медијуму 15-20 секунди. Преломити штапић по назначеној линији, остављајући крај четкице у туби.

 

БРИС СА СИНТЕТСКОМ ВАТОМ И ПЛАСТИЧНИМ ШТАПИЋЕМ

Увући брис 1-1,5цм у канал грлића материце

Ротирати брис 3-4 пута (360о) у правцу супротно казаљке на сату

Уколико постоје промене на грлићу, брисом енергично узети материјал и са промене

Брис пажљиво ставити у епрувету са 2-3мл транспортног медијума за вирусе. Енергично мућкати у медијуму 15-20 секунди. Преломити штапић по назначеној линији или одсећи маказама врх бриса остављајући га у туби.

 

БИОПТАТ:

По узимању, биоптат одмах ставити у посуду (епрувету) са 2-3мл транспортног медијума за вирусе. Посуду затворити.

 

Узимање узорака код мушкараца

тест се може радити из узорка уретралног бриса или сперме. 

 

Уретрални епителијални брис, добијен на универзални начин,  ставити у епрувету.

Налити 2-3мл транспортног медијума. Преломити штапић по назначеној линији или одсећи маказама врх бриса остављајући га у туби.

 

Препоручљиво је да се узорци обраде одмах по узорковању. Уколико то није могуће, узорке чувати и транспортовати у року од 1-2 сата на собној температури (18-25 ℃), или у року од 4-5 дана на температури од 2-8 ℃.

Након тог времена узорке брисева замрзнути на -20 ℃и на тој температури их и транспортовати до лабораторије.

 

 САКУПЉАЊЕ УЗОРАКА, ЧУВАЊЕ И ТРАНСПОРТ ради детекције вируса INFLUENZA А и B,  Real time PCR методом

Узорци погодни за ову анализу су:

Назални, назофарингеални, орофарингеални брисеви: узети брис и ставити  у транспортни медијум. Комбинација два бриса у једној подлози (назални и орофарингеални) повећава могућност детекције вируса. Брисеви из горњег респираторног тракта имају предност у односу на остале узорке јер се на тим местима вирус највише умножава.

Индуковани спутум, спутум (испљувак), аспират бронха, бронхоалвеоларног лават  (БАЛ), назални испирак, ткива: налити садржај за анализу транспортним медијумом, из епрувете  и чврсто затворити бочицу.

Узорке што пре доставити микробиолошкој лабораторији за PCR дијагностику у ЗЗЈЗ Кикинда. До момента достављања чувати узорке на +2-8℃ , или их замрзнути.